中华人民共和国国家标准 GB5009.273—2016 食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.273—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替SN/T2678—2010《进出口淡水产品中微囊藻毒素的检测方法 酶联免疫吸附法》。 本标准与SN/T2678—2010相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定”; ———增加了液相色谱-串联质谱法。GB5009.273—2016 1 食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定 1 范围 本标准规定了水产品中微囊藻毒素(环状七肽)的液相色谱-串联质谱和间接竞争酶联免疫吸附的 测定方法。 本标准适用于鱼、虾、河蚌等水产品中微囊藻毒素的测定。 第一法 液相色谱-串联质谱法 2 原理 试样中的微囊藻毒素(MC-LR,MC-RR和MC-YR)经甲醇溶液提取,固相萃取小柱净化,液相色 谱-串联质谱测定,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH4O):色谱纯。 3.1.2 甲酸(CH2O2):色谱纯。 3.1.3 甲酸铵(CH5O2N):色谱纯。 3.1.4 乙腈(C2H3N):色谱纯。 3.1.5 氮气:纯度≥99.99%。 3.2 试剂配制 3.2.1 甲醇溶液(20%):将20mL甲醇与80mL水混合均匀。 3.2.2 甲醇溶液(80%):将80mL甲醇与20mL水混合均匀。 3.2.3 淋洗溶液:10mL水;10mL甲醇溶液(20%)。 3.2.4 含0.1%甲酸的甲醇溶液:用甲醇将0.1mL甲酸定容至100mL。 3.3 标准品 微囊藻毒素标准品:微囊藻毒素-LR(MC-LR,C49H74N10O12,CAS号101043-37-2)、微囊藻毒素- YR(MC-YR,C52H72N10O13,CAS号101064-48-6)、微囊藻毒素-RR(MC-RR,C49H75N13O12,CAS号 111755-37-4),纯度均≥95%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 微囊藻毒素标准储备液(10μg/mL):分别称取微囊藻毒素标准品MC-LR、MC-YR、MC-RR各GB5009.273—2016 2 0.5mg(按实际含量折算,精确至0.01mg),用500μL甲醇溶解,再用水定容至50mL。标准储备液贮 存于密闭棕色玻璃瓶中,于-20℃储存,有效期为3个月。 3.4.2 标准中间液(10ng/mL):吸取微囊藻毒素标准储备液(10μg/mL)10μL于10mL容量瓶中,用 甲醇定容至刻度。标准中间液于-20℃冷冻避光保存,有效期为3个月。 3.4.3 基质匹配的混合标准系列工作液:用空白基质溶液将微囊藻毒素标准中间溶液(10ng/mL)稀释 成含量为0.1μg/L、0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L和5.0μg/L的混合标准系列工作液。现用 现配。 3.5 材料 3.5.1 固相萃取小柱:ODSC18柱,500mg/6mL,或性能相当者。 3.5.2 有机相微孔滤膜:0.22μm。 3.5.3 玻璃纤维滤纸:GF/F规格,或性能相当者。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-质谱仪:配有电喷雾离子源。 4.2 分析天平:感量为0.001g和0.00001g。 4.3 离心机:转速大于8000r/min。 4.4 均质器。 4.5 旋转蒸发仪。 4.6 涡旋振荡器。 5 分析步骤 5.1 试样制备 取样品的可食部分约500g,充分均质或粉碎,装入洁净容器中,密封,并标明标记。试样置于 -18℃以下避光保存,一个月内须完成检测。 5.2 提取 准确称取5g(精确至0.01g)试样,置于50mL离心管中,加入10mL甲醇溶液(80%),充分振荡 均匀,8000r/min离心10min,取上清液于新离心管中。残渣重复提取一次,合并两次提取液,提取液 定容至30mL,以玻璃纤维滤纸过滤。取6mL滤液加入30mL水稀释。待净化。 5.3 净化 C18固相萃取小柱使用前依次用10mL甲醇和10mL水活化,流速控制在1滴/s~2滴/s。将提取 液全部过柱后,用10mL甲醇溶液(20%)淋洗,以10mL含有0.1%甲酸的甲醇溶液洗脱,收集洗脱液, 以氮气浓缩至近干。加入1mL甲醇溶液(20%)充分溶解残渣,用有机相微孔滤膜过滤,待上机检测。 5.4 空白对照试验 分别称取与待测样品基质相同、不含所测微囊藻毒素的空白试样10份于50mL离心管中。以下 操作按5.2和5.3的操作处理。合并10份空白试样溶液,用微孔滤膜过滤。滤液可作为空白基质溶液 配制基质匹配的混合标准系列工作液。