书 书 书犐犆犛 １１ ． ２２０ 犅 ４１ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 １８６４０ — ２０１７ /G21 /G22 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C 犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犱狅犿犲狊狋犻犮犪狀犻犿犪犾狊犮犺犻狊狋狅狊狅犿犻犪狊犻狊 ２０１７  １１  ０１ /G2D /G2E ２０１８  ０５  ０１ /G2F /G30 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G2F /G31 /G32 /G33 /G21 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G34 /G35 /G36 /G37 /G38 /G39 /G2D /G2E书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 《 家畜日本血吸虫病诊断技术 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 相比主要变化如下 ： ——— 增加了日本血吸虫病 、 中间宿主 、 疫水等 ８ 条术语的定义 。 ——— 增加了 ＩＨＡ 和 ＳＥＡ 两条缩略语的注解 。 ——— 增加了家畜日本血吸虫病的临床诊断 、 剖检检查以及诊断结果的综合判定等内容 。 ——— 修订了 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 中粪便毛蚴孵化法 ， 补充了不同种类动物粪样的处理方法 ， 增加了尼龙筛兜直接淘洗法 ， 将孵化温度由 ２０℃ ～ ２５℃ 修订为 ２０℃ ～ ３０℃ ， 孵化方法上增加了顶管孵化法 。 ——— 修订了 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 中间接血凝试验 （ ＩＨＡ ） 方法 ， 规定了诊断液和标准血清的基本性质 ， 增加了血样采集方法 ， 规范了操作方法 ， 对判定标注进行了量化 。 ——— 改变了 ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 的编写格式 ， 将各单项技术所需材料 、 试剂 、 仪器合并介绍 ， 同时将各单项技术的结果判定合并到诊断结果项下进行综合判定 。 本标准由中华人民共和国农业部提出 。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１８１ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院上海兽医研究所 。 本标准起草人 ： 刘金明 、 林矫矫 、 石耀军 、 李浩 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１８６４０ — ２００２ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １８６４０ — ２０１７ 家畜日本血吸虫病诊断技术 １ 　 范围 本标准规定了家畜 （ 牛 、 羊 、 猪 、 犬和马属动物 ） 日本血吸虫病临床诊断 、 间接血凝试验 （ ＩＨＡ ）、 病原学诊断的方法和程序 。 本标准适用于家畜 （ 牛 、 羊 、 猪 、 犬和马属动物 ） 日本血吸虫病的诊断 、 检疫 、 流行病学调查和防治效果评价 。 ２ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ２ ． １ 日本血吸虫病 　 狊犮犺犻狊狋狅狊狅犿犻犪狊犻狊犼犪狆狅狀犻犮犪 由日本血吸虫感染人和动物所引起的疾病 。 ２ ． ２ 中间宿主 　 犻狀狋犲狉犿犲犱犻犪狋犲犺狅狊狋 寄生虫在无性繁殖阶段所寄生的动物 。 ２ ． ３ 疫水 　 犻狀犳犲犮狋犲犱狑犪狋犲狉 被细菌 、 病毒等微生物以及寄生虫所污染的 ， 具有传染性的水源 。 注 ： 本标准中专指含有日本血吸虫尾蚴的水 。 ２ ． ４ 成虫 　 犪犱狌犾狋狑狅狉犿 性发育成熟的虫体 。 ２ ． ５ 虫卵 　 犲犵犵 雌虫和雄虫交配后产的卵 。 ２ ． ６ 毛蚴 　 犿狔狉犪犮犻犱犻狌犿 从吸虫虫卵中孵化出的幼虫 。 ２ ． ７ 毛蚴孵化 　 犿犻狉犪犮犻犱犻狌犿犺犪狋犮犺犻狀犵 虫卵转变成毛蚴的过程 。 ２ ． ８ 虫卵可溶性抗原 　 狊狅犾狌犫犾犲犲犵犵犪狀狋犻犵犲狀 虫卵裂解后释放的溶解于生理盐水的抗原分子 。 ２ ． ９ 间接血凝试验 　 犻狀犱犻狉犲犮狋犺犲犿犪犵犵犾狌狋犻狀犪狋犻狅狀 以红细胞作为载体的间接凝集试验 。 １ 犌犅 ／ 犜 １８６４０ — ２０１７ ３ 　 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 ＩＨＡ ： 间接血凝试验 （ ｉｎｄｉｒｅｃｔｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ） ＳＥＡ ： 日本血吸虫虫卵可溶性抗原 （ ｓｏｌｕｂｌｅｅｇｇａｎｔｉｇｅｎ ） ４ 　 材料与试剂 ４ ． １ 　 材料 竹筷 、 ４０ 目 ～ ８０ 目的铜筛滤杯 、 ２６０ 目的尼龙筛兜 、 ５００ｍＬ 量杯 、 粪桶 、 放大镜 、 显微镜 、 吸管 、 载玻片 、 盖玻片 、 取暖炉 、 水温计 、 盆 、 水缸 、 水桶 、 剪刀 、 闹钟 、 天平 、 脱脂棉 、 ３００ｍＬ ～ ５００ｍＬ 长颈平底烧瓶或带顶管的塑料杯 （ ５００ｍＬ ～ １０００ｍＬ ） 或 ５００ｍＬ 盐水瓶及与瓶口相配的 １０ｍＬ 试管 、 家畜解剖刀具 、 手术剪 、 止血钳 、 内径 ５ｍｍ ～ １０ｍｍ 的铜管或玻璃管以及与此相匹配的橡皮管 、 ９６ 孔 Ｖ 型微孔血凝板 （ 孔底角 ９０° ）、 移液器及吸头 、 定性滤纸等 。 ４ ． ２ 　 孵化用水 自来水 、 河水 、 池水 、 井水等 ， ｐＨ 值 ６．８ ～ ７．２ 。 处理方法如下 ： 自来水 ， 在盛器中存放 ８ｈ 以上 ； 河水 、 池水 、 井水等 ， 加温至 ６０℃ 以上 ， 冷却 ； 混浊的水 ， 每 ５０Ｌ 水加明矾 ３ｇ ～ ５ｇ ， 充分搅拌 ， 澄清 。 ４ ． ３ 　 试剂 日本血吸虫病 ＩＨＡ 诊断液为日本血吸虫虫卵可溶性抗原 ＳＥＡ 致敏绵羊红细胞或人 “ Ｏ ” 型红细胞 ， 效价 ≥ ６４ 。 标准阴性血清 ， ＩＨＡ 效价 ≤ ４ ， 标准阳性血清 ， ＩＨＡ 效价 ≥ １２８０ 。 生理盐水 。 市售或由指定单位提供 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 组织捣碎机 （ 或高速分散均质机 ）。 ５ ． ２ 　 显微镜 。 ５ ． ３ 　 解剖镜 。 ６ 　 临床诊断 ６ ． １ ． １ 　 诊断原则 根据血吸虫病流行病学特点和临床症状进行诊断 。 ６ ． １ ． ２ 　 流行特点 容易感染日本血吸虫的家畜主要有牛 、 羊 、 猪 、 犬以及马属动物 。 中间宿主为钉螺 。 流行区主要分布于有钉螺孳生的长江以南十二个省 （ 市 、 自治区 ）； 家畜因接触疫水而感染 ， 大多数疫区的感染季节为 ３ 月 ～ １１ 月 。 ６ ． １ ． ３ 　 临床症状 ６ ． １ ． ３ ． １ 　 黄牛和奶牛主要临床症状 黄牛和奶牛主要临床症状如下 ： ２ 犌犅 ／ 犜 １８６４０ — ２０１７ ——— 急性型症状 ： 多见于重度感染小牛 ， 偶见于成年黄牛 。 典型症状为体温升高达 ４０℃ 以上 ， 消瘦 ， 被毛粗乱 ， 拉稀 ， 便血 ， 生长停滞 ， 黄牛使役力下降 ， 奶牛产奶量下降 ， 母畜不孕或流产 。 特别严重者肛门括约肌松弛 ， 直肠外翻 、 疼痛 ， 食欲不振 ， 步态摇摆 、 久卧不起 ， 呼吸缓慢 ， 最后衰竭而死亡 。 ——— 慢性型症状 ： 消瘦 ， 畏寒 ， 被毛粗乱 ， 拉稀 ， 偶有便血 ， 精神不振 。 轻度感染者可无症状 。 ６ ． １ ． ３ ． ２ 　 绵羊和山羊主要临床症状 食欲减退 ， 消瘦 ， 腹泻 ， 下痢 ， 贫血 ， 精神不振 。 严重者至衰竭而死亡 。 ６ ． １ ． ３ ． ３ 　 水牛 、 马属动物 、 猪和犬主要临床症状 一般没有明显临床症状 。 重度感染者有腹泻 ， 下痢 ， 贫血 ， 消瘦 ， 被毛粗乱等症状 。 ７ 　 间接血凝试验 （ 犐犎犃 ） ７ ． １ 　 血样采集 ７ ． １ ． １ 　 血清 ： 颈静脉或耳缘静脉采血 １ｍＬ ～ ２ｍＬ ， 静置自然析出血清或待血液凝固后 ３０００ｒ ／ ｍｉｎ ～ ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 分离血清 ， ４℃ 保存 。 ７ ． １ ． ２ 　 血纸 ： 在耳缘静脉采血 ５ 滴 ～ １０ 滴 ， 滴于定性滤纸 ， 于阴凉处晾干 ， 放在干净白纸中 ， ２ｄ 内检测 。 也可保存于 ４℃ 冰箱 １ 个月内检测 。 ７ ． ２ 　 操作方法 ７ ． ２ ． １ 　 剪下 １ｃｍ×１．２ｃｍ 血纸 ， 加 ２００ μ Ｌ 生理盐水 ， 浸泡 １０ｍｉｎ ， 为血纸浸泡液 。 取 １００ μ Ｌ 用生理盐水作 １∶２ 稀释 。 ７ ． ２ ． ２ 　 血清稀释 ： 用生理盐水将血清作 １∶１０ 和 １∶２０ 稀释 。 ７ ． ２ ． ３ 　 加样 ： 取 １∶１０ 和 １∶２０ 稀释的血清或血纸浸泡液及 １∶２ 稀释的血纸浸泡液样品各 ２５ μ Ｌ ， 加入 ９６ 孔 Ｖ 型微孔血凝板样品孔 ， 每个稀释度样品加 ２ 孔 。 每块血凝板需设标准阳性血清 、 标准阴性血清和生理盐水对照 。 ７ ． ２ ． ４ 　 加诊断液 ： 每孔加 ２５ μ Ｌ 诊断液 ， 震荡混匀 。 ７ ． ２ ． ５ 　 孵育 ： 室温孵育 １ｈ ～ ２ｈ ， 然后观察并判定结果 。 ７ ． ３ 　 判定 ７ ． ３ ． １ 　 判定方法 判定方法如下 ： ——— 红细胞完全不凝集 ， 即全部下沉到孔底中央 ， 形成周缘整