中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 ICS 65.120 CCS B 46 GB/T 20189—2025 饲料中β⁃⁃受体激动剂的测定 液相色谱 ⁃⁃串联质谱法 Determination of β⁃receptor agonists in feeds — Liquid chromatography⁃tandem mass spectrometry 2025 ⁃06⁃30 发布 2026 ⁃01⁃01 实施 国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布代替 GB/T 22147—2008 ，GB/T 20189—2006GB/T 20189—2025 前　　言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规 定起草。 本文件代替 GB/T 20189 —2006《饲料中莱克多巴胺的测定　高效液相色谱法 》和GB/T 22147 — 2008《饲料中沙丁胺醇 、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗的测定　液相色谱质谱联用法 》 ，与GB/T 20189 — 2006和GB/T 22147 —2008相比，除结构调整和编辑性改动外 ，主要技术变化如下 ： a）更改了适用范围 、检出限和定量限 ，增加了检测对象为 21种β ⁃ 受体激动剂 （见第 1章，GB/T 20189 — 2006和GB/T 22147 —2008的第 1章） ； b）更改了原理 （见第 4章，GB/T 20189 —2006和GB/T 22147 —2008的第 3章） ； c）更改了试剂或材料 （见第 5章，GB/T 20189 —2006和GB/T 22147 —2008的第 4章） ； d）更改了仪器设备 （见第 6章，GB/T 20189 —2006和GB/T 22147 —2008的第 5章） ； e）更改了样品制备方法 ，删除了采样 （见第 7章，GB/T 20189 —2006和GB/T 22147 —2008的 第6章） ； f）更改了试验步骤 （见第 8章，GB/T 20189 —2006的7.1和GB/T 22147 —2008的7.1.1） ； g）更改了精密度 （见第 10章，GB/T 20189 —2006和GB/T 22147 —2008的第 9章） 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会 （SAC/TC 76）提出并归口 。 本文件起草单位 ：四川省饲料工作总站 、四川威尔检测技术股份有限公司 、中国农业科学院农业质 量标准与检测技术研究所 、四川省农产品质量安全中心 、四川大学 。 本文件主要起草人 ：赵立军、张凤枰、樊霞、吴亚姗、邓苹玲、刘文彬、张静、索德成、岳琴、李云、 陈红、丁小荞、李沁芮、王莹、卞正容、陈晓春。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 ： ——2006年发布为 GB/T 20189 —2006，2008年发布为 GB/T 22147 —2008； ——本次为第一次修订 。 Ⅰ GB/T 20189—2025 饲料中β⁃受体激动剂的测定 液相色谱 ⁃串联质谱法 1　范围 本文件描述了饲料中 21种β⁃受体激动剂的液相色谱 ⁃串联质谱测定方法 。 本文件适用于配合饲料 、浓缩饲料 、精料补充料和添加剂预混合饲料中班布特罗 、苯氧丙酚胺 、卡 布特罗、克伦潘特 、克伦普罗 、克伦塞罗 、克伦特罗 、莱克多巴胺 、利托君、氯丙那林 、马布特罗 、马喷特 罗、羟甲基克伦特罗 、齐帕特罗 、沙丁胺醇 、特布他林 、妥布特罗 、西布特罗 、西马特罗 、溴布特罗和溴代 克伦特罗的测定 。 本文件中沙丁胺醇 、莱克多巴胺 、克伦特罗的检出限为 5 μg/kg，定量限为 10 μg/kg；其余化合物的 检出限为 10 μg/kg，定量限为 50 μg/kg。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于 本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195　动物饲料　试样的制备 3　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4　原理 试样中待测物用盐酸 ⁃甲醇溶液提取 ，经固相萃取柱或滤膜净化 ，液相色谱 ⁃串联质谱仪测定 ，基质 匹配标准曲线校准 ，外标法定量 。 5　试剂或材料 除非另有规定 ，仅使用分析纯试剂 。 5.1　水：GB/T 6682，一级。 5.2　甲醇：色谱纯。 5.3　乙腈：色谱纯。 5.4　甲酸：色谱纯。 5.5　盐酸溶液 （0.1 mol/L） ：移取 8.3 mL盐酸，用水稀释 、定容至 1 000 mL，混匀。 5.6　盐酸 ⁃甲醇溶液 ：移取 80 mL盐酸溶液 （5.5） ，加入甲醇 （5.2）20 mL，混匀。 5.7　5%氨水甲醇溶液 ：移取 5 mL氨水与 95 mL甲醇（5.2） ，混匀。 1 GB/T 20189—2025 5.8　0.1%甲酸溶液 ：移取 0.5 mL甲酸（5.4） ，用水稀释 、定容至 500 mL，混匀。 5.9　0.1%甲酸乙腈溶液 ：移取 0.5 mL甲酸（5.4） ，用乙腈（5.3）稀释、定容至 500 mL，混匀。 5.10　标准储备溶液 （1 mg/mL ，以化合物原型计 ） ：分别准确称取 21种β⁃受体激动剂 （中英文名称 、 CAS号、纯度等按附录 A规定执行 ）标准品适量 （精确至 0.01 mg） ，用甲醇（5.2）溶解、定容、混匀。于 -18 ℃以下保存 ，有效期 12个月。或购买有证标准溶液 。 5.11　混合标准中间溶液 （10 μg/mL） ：分别准确移取标准储备溶液 （5.10）0.5 mL于50 mL容量瓶中 ， 用甲醇（5.2）稀释、定容、混匀。于-18 ℃以下保存 ，有效期 6个月。 5.12　混合标准系列溶液 ：准确移取适量混合标准中间溶液 （5.11） ，用0.1%甲酸溶液 （5.8）稀释、定容、 混匀，配制成质量浓度分别为 1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的混合 标准系列溶液 ，临用现配 。 5.13　固相萃取柱 ：混合型阳离子交换柱 ，60 mg/ 3 mL，或性能相当者 。 5.14　微孔滤膜 ：0.22 μm，有机系。 6　仪器设备 6.1　液相色谱 ⁃串联质谱仪 ：配电喷雾离子源 。 6.2　分析天平 ：精度 0.01 g和0.000 01 g。 6.3　涡旋混合器 。 6.4　超声波清洗器 。 6.5　振荡混合器 。 6.6　离心机 ：转速不低于 8 000 r/min。 6.7　固相萃取装置 。 6.8　氮吹仪 ：温度可控制在 50 ℃。 7　样品 按GB/T 20195制备试样 ，称取样品至少 200 g，粉碎后通过 0.425 mm孔径的试验筛 ，充分混匀 ， 装入密闭容器中保存 ，备用。选取类型相同 ，均匀一致 、且在待测物保留时间处 ，仪器响应值小于方法 定量限 30%的饲料样品 ，作为空白试样 。 8　试验步骤 8.1　提取 平行做两份试验 。称取试样 2 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管中 ， 准确加入 20 mL盐酸 ⁃甲醇 溶液（5.6） ，涡旋混匀 ，振荡提取 20 min，以8 000 r/min离心 5 min，上清液作为备用液 。 8.2　净化 8.2.1　配合饲料 、浓缩饲料和精料补充料 固相萃取柱依次用 3 mL甲醇、3 mL水活化。准确移取 5 mL备用液（8.1）过柱，依次用 3 mL水、 3 mL甲醇淋洗 ，抽干，用5 mL 5%氨水甲醇溶液 （5.7）洗脱，收集洗脱液 ，于50 ℃氮气吹干 ，准确加入 1 mL 0.1%甲酸溶液 （5.8）溶解，涡旋混匀 ，过微孔滤膜 （5.14） ，备用。 2 GB/T 20189—2025 8.2.2　添加剂预混合饲料 取适量备用液 （8.1） ，过两次微孔滤膜 （5.14） ，备用。 8.3　基质匹配混合标准系列溶液制备 8.3.1　配合饲料 、浓缩饲料 、精料补充料 选取同类型空白基质试样 ，按8.1和8.2.1步骤处理至氮气吹干 ，准确加入 1 mL混合标准系列溶 液（5.12）复溶，配制成质量浓度分别为 1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 基质匹配混合标准系列溶液 。 8.3.2　添加剂预混合饲料 选取同类型空白基质试样 ，按8.1和8.2.2步骤处理 ，准确移取适量上清液稀释混合标准中间溶液 （5.11）至 适 宜 浓 度 ，再 将 其 稀 释 成 质 量 浓 度 分 别 为 1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、 50 ng/mL、100 ng/mL基质匹配混合标准系列溶液 。 8.4　测定 8.4.1　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 ： a）色谱柱：C18柱，柱长 100 mm，内径 2.1 mm，粒径 1.8 µm，或性能相当者 ； b）柱温：35 ℃； c）流速：0.3 mL/min ； d）进样量：5 μL； e）流动相：A：0.1%甲酸溶液 （5.8） ，B：0.1%甲酸乙腈溶液 （5.9） ，梯度洗脱程序见表 1。 表1　梯度洗脱程序 时间 min