ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T21035—2025 代替GB/T21035—2007 饲料安全性评价 致畸试验 Feedsafetyassessment—Teratogenicitytest 2025-06-30发布 2026-01-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21035—2007《饲料安全性评价 喂养致畸试验》,与GB/T21035—2007相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了部分术语和定义(见第3章); b) 增加了试验原理(见第4章); c) 增加了溶液配制(见第5章); d) 增加了仪器设备的种类(见第6章); e) 增加了受试物(见第7章) f) 增加了试验动物的性别、数量和体重要求,并增加了种、系选择的要求(见8.1); g) 增加了动物饲养要求(见8.3); h) 增加了剂量分组的具体细节和要求,如剂量选择的依据、母体动物死亡率等(见第9章); i) 增加了受试物配制方法和给予体积(见10.1.1); j) 更改了传统致畸试验中给予大鼠受试物的方法(见10.1.1,2007年版的8.1); k) 增加了母体观察和称重(见10.3); l) 增加了“表1活胎外观检查项目”“表2胎仔骨骼常见异常情况”和“表3胎仔器官常见异常情 况”(见10.4); m) 更改了标本制作的方法细节(见10.4.3,2007年版的8.6); n) 增加了胎鼠不同位置切面图(见10.4.4); o) 增加了试验报告(见第12章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业大学、华中农业大学、湖南农业大学、乐山师范学院、中国兽医药品监察 所、中国农业科学院质量标准化研究所、阿坝藏族羌族自治州畜牧科学技术研究所、四川省阿坝州金川 多勒牦牛有限公司。 本文件主要起草人:程林丽、沈建忠、汤树生、齐德生、王旭、曾建国、刘秀斌、刘兆颖、杨秀玉、宋荣、 魏书玲、林涛、杜瑞良、贺晓云、雷艳敏、杨文军、张燕、申文兵、孙鸿强。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2007年首次发布为GB/T21035—2007; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21035—2025 饲料安全性评价 致畸试验 1 范围 本文件界定了饲料安全性评价致畸试验的相关术语,描述了试验原理、试剂及溶液配制、仪器设备、 受试物、实验动物及饲养管理、剂量分组、操作步骤、数据处理和结果评价,规定了试验报告内容要求。 本文件适用于饲料和饲料添加剂的致畸性评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB14922 实验动物 微生物、寄生虫学等级及监测 GB/T14924.1 实验动物 配合饲料通用质量标准 GB14925 实验动物 环境及设施 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 发育毒性 developmentaltoxicity 个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前(包括胚期、胎期以及出生后)出现的发育生物体的 结构异常、生长改变、功能缺陷或死亡等有害作用。 3.2 致畸性 teratogenicity 受试物在妊娠的关键时期(尤其是器官发生期间),引起子代永久性结构异常的性质。 3.3 母体毒性 maternaltoxicity 受试物引起亲代妊娠动物直接或间接的健康损害效应,引起增重减少、功能异常、中毒体征,甚至死 亡的毒性。 3.4 分娩率 parturitionindex 分娩获得的活仔的动物数占妊娠动物数的百分比。 3.5 死胎率 fetalmortality 死胎仔数占胎仔总数的百分比。 3.6 畸胎总数 sumofterata 出现畸形的所有活胎仔数。 1GB/T21035—2025 3.7 畸胎出现率 incidenceofterata 畸胎总数占活胎总数的百分比。 3.8 单项畸形出现率 incidenceofsingleteratosis 出现某种畸形的活胎仔数占活胎仔总数的百分比。 3.9 畸形种类数 sumkindsofteratosis 所有活胎仔出现的各种畸形种类数。 3.10 活胎仔平均畸形出现率 meanincidenceofteratosis 畸形总数占活胎仔总数的百分比。 3.11 母体畸胎出现率 incidenceofterataparturition 分娩畸胎的母体数占妊娠母体总数的百分比。 3.12 半数致死量 medianlethaldose;LD50 在规定时间内,通过指定途径,使一定体重或年龄的某种动物半数死亡所需受试品的剂量。 3.13 无可见有害作用水平 noobservedadverseeffectlevel;NOAEL 在规定的试验条件下,用现有的技术手段或检测指标未见到任何与受试物有关的毒性作用的最大 染毒剂量或浓度。 3.14 最小可见损害作用水平 minimiumobservedadverseeffectlevel;LOAEL 在规定的暴露条件下,通过实验和观察,一种物质引起实验动物某种有害作用的最低剂量或浓度。 4 试验原理 母体在孕期受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用,影响胚胎的器官分化与发育,导致结构异 常,出现胎仔畸形。通过在受孕动物胚胎的器官形成期给予受试物,检出该物质对胎仔的致畸作用。 5 试剂及溶液配制 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,二级。 5.2 乙醇固定液:95%(体积分数)乙醇溶液。 5.3 鲍因(Bouins)固定液:分别量取饱和苦味酸溶液(2,4,6-三硝基酚饱和液)750mL、40%甲醛 250mL和冰乙酸50mL,混匀。 5.4 10g/L氢氧化钾溶液:称取1.0g氢氧化钾,加水溶解并稀释至100mL,混匀。 5.5 20g/L氢氧化钾溶液:称取2.0g氢氧化钾,加水溶解并稀释至100mL,混匀。 5.6 茜素红(alizarinred)贮备溶液:将0.2g以上的茜素红加入5mL乙酸、10mL纯甘油和60mL 1%水合氯醛的混合液中至饱和,避光保存。 5.7 茜素红应用液Ⅰ:取茜素红贮备液(5.6)3mL~5mL,用氢氧化钾溶液(5.4或5.5)稀释至 2GB/T21035—2025 1000mL。按照染色效果确定茜素红贮备液的体积和氢氧化钾溶液的质量浓度,临用现配,。 5.8 茜素红应用液Ⅱ:称取茜素红0.1g,氢氧化钾10g,用水溶解并稀释至1000mL,混匀,临用现配。 注:茜素红应用液Ⅱ采用剥皮法进行骨骼染色的染色液。 5.9 脱水透明液A:甘油200mL、氢氧化钾溶液(5.5)30mL,加水至1000mL,混匀。 5.10 脱水透明液B:甘油500mL、氢氧化钾溶液(5.5)30mL,加水至1000mL,混匀。 6 仪器设备 6.1 放大镜:放大倍数为8倍~10倍。 6.2 解剖显微镜:7倍~220倍。 6.3 光学显微镜:40倍~1600倍。 6.4 体视显微镜:7.8倍~160倍。 6.5 分析天平:精度为0.001g。 6.6 游标卡尺(百分尺):精度通常为0.02mm。 7 受试物 受试物应采用制备工艺稳定、符合质量标准规定的原始样品,如不能直接使用原始样品,应对受试 物进行相应处理。 8 实验动物及饲养管理 8.1 实验动物 8.1.1 种、系选择 实验动物的选择应符合GB14922的有关规定。首选啮齿类大鼠,在推荐需要采用第二种哺乳动 物时非啮齿类首选家兔。若选用其他物种应给出理由。选用健康、性成熟的雄性动物和未经交配的雌 性动物,试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的±20%。雌性应和与其交配的雄性属于相同 的种属和品系。所用动物应注明种类、品系、性别、体重和周龄。 8.1.2 动物性别和数量 性成熟雄性和雌性动物通常按1∶1或1∶2比例合笼交配,如果5d内未交配,应更换雄性动物。 大鼠每个剂量水平的妊娠动物数不少于20只,家兔每个剂量水平的妊娠动物数不少于12只。 8.2 动物准备 试验前动物在实验动物房至少适应性饲养3d~5d。 8.3 饲养管理 8.3.1 饲养条件应符合GB14925规定。 8.3.2 饲料符合GB/T14924.1规定。 8.3.3 试验期间动物自由饮水和摄食,妊娠动物应单笼饲养。 3GB/T21035—2025 9 剂量分组 9.1 剂量组设置 试验至少设4组,其中受试物设3个剂量组,另设一个空白对照组或溶剂对照组。溶剂对照组除不 给受试物外,其余处理均同剂量组。必要时还要设阳性对照组。剂量一般选择在1/10~1/100母体 LD50之间。LD50主要通过动物实验获得。高剂量组原则上使部分动物出现某些发育毒性和/或母体毒 性,如体重轻度减轻等,但不至于引起死亡或严重毒性,如果母体动物有死亡发生,应不超过母体动物数 量的1/10。低剂量不应出现任何观察到母体毒性或发育毒性。在高剂量组与低剂量组之间设1个~ 2个中剂量组,递减剂量系列的间距为2倍~4倍。当组间差距较大时(如超过10倍),增加一个剂 量组。 9.2 试验剂量的设