中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 ICS 65.120 CCS B 46 GB/T 22261—2025 饲料中维吉尼亚霉素的测定 Determination of virginiamycin in feeds 2025 ⁃06⁃30 发布 2026 ⁃01⁃01 实施 国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布代替 GB/T 22261—2008GB/T 22261—2025 前　言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规 定起草。 本文件代替 GB/T 22261 —2008《饲料中维吉尼亚霉素的测定　高效液相色谱法 》 ，与GB/T 22261 — 2008相比，除结构调整和编辑性改动外 ，主要技术变化如下 ： a）更改了适用范围 、检出限和定量限 （见第 1章，2008年版的第 1章） ； b）增加了液相色谱 ⁃串联质谱法 （见第 4章） ； c）更改了高效液相色谱法的原理 、试验步骤和试验数据处理 （见第 5章，2008年版的第 3章和 第7章） 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会 （SAC/TC 76）提出并归口 。 本文件起草单位 ：浙江金大康动物保健品有限公司 、浙江省动物疫病预防控制中心 （浙江省兽药饲 料监察所 ） 。 本文件主要起草人 ：黄娟、裘丞军、刘靥、吕伟军、周炜、陈洁、陈勇、赵丽丽、罗成江、沈红霞、袁璐、 王彬、张志健、阮鑫。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 ： ——2008年首次发布为 GB/T 22261 —2008； ——本次为第一次修订 。 Ⅰ GB/T 22261—2025 饲料中维吉尼亚霉素的测定 1　范围 本文件描述了饲料中维吉尼亚霉素的液相色谱 ⁃串联质谱和高效液相色谱测定方法 。 本文件适用于配合饲料 、浓缩饲料 、精料补充料 、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中维吉尼 亚霉素（以维吉尼亚霉素 M1和维吉尼亚霉素 S1之和计）的测定。 本文件液相色谱 ⁃串联质谱法的检出限为 0.02 mg/kg，定量限为 0.05 mg/kg；高效液相色谱法的检 出限为 0.5 mg/kg，定量限为 1 mg/kg。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于 本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195　动物饲料　试样的制备 3　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4　液相色谱 ⁃串联质谱法 4.1　原理 试样中的待测物用乙酸乙酯提取 ，经净化盐包和固相萃取柱净化 ，液相色谱 ⁃串联质谱仪测定 ，外 标法定量 。 4.2　试剂或材料 除非另有规定 ，仅使用分析纯试剂 。 4.2.1　水：GB/T 6682，一级。 4.2.2　乙酸乙酯 。 4.2.3　正己烷。 4.2.4　甲醇：色谱纯。 4.2.5　乙腈：色谱纯。 4.2.6　甲酸：色谱纯。 4.2.7　乙酸铵溶液 （0.05 mmol/L ，pH 4.0） ：称取 3. 85 g无水乙酸铵 ，用水溶解稀释定容至 1 000 mL， 用冰乙酸调节 pH至4.0。 4.2.8　甲醇乙酸铵溶液 ：甲醇（4.2.4）+乙酸铵溶液 （4.2.7）=1+3（体积比） 。 4.2.9　40%甲醇溶液 ：量取 40 mL甲醇（4.2.4） ，用水稀释至 100 mL，混匀。 1 GB/T 22261—2025 4.2.10　40%乙腈溶液 ：量取 40 mL乙腈（4.2.5） ，用水稀释至 100 mL，混匀。 4.2.11　0.1%甲酸溶液 ：移取 1 mL甲酸（4.2.6） ，用水稀释至 1 000 mL，混匀。 4.2.12　0.1%甲酸乙腈溶液 ：移取 1 mL甲酸（4.2.6） ，用乙腈（4.2.5）稀释至 1 000 mL，混匀。 4.2.13　标准储备溶液 （1 000 μg/mL）：准确称取维吉尼亚霉素 M1（CAS：21411 ⁃53⁃0，纯度不小于 95%）和维吉尼亚霉素 S1（CAS：23152 ⁃29⁃6，纯度不小于 95%）标准品各 10 mg（精确至 0.01 mg） ，分别 置于 10 mL棕色容量瓶中 ，用乙腈（4.2.5）溶解、定容，混匀。2 ℃~ 8 ℃避光保存 ，有效期 3个月。 4.2.14　混合标准中间溶液 （10 μg/mL） ：准确移取标准储备溶液 （4.2.13）各1 mL于100 mL棕色容量 瓶中，用乙腈（4.2.5）定容，混匀。临用现配 。 4.2.15　混合标准系列溶液 ：准确移取适量混合标准中间溶液 （4.2.14）于棕色容量瓶中 ，用40%乙腈溶 液（4.2.10）配制成质量浓度分别为 1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、 500 ng/mL的混合标准系列溶液 。临用现配 。 4.2.16　净化盐包 ：含N⁃丙基乙二胺 （PSA）50 mg、C18 25 mg。 4.2.17　亲水亲脂平衡型固相萃取柱 ：200 mg/ 6 mL，或性能相当者 。 4.2.18　微孔滤膜 ：0.22 μm，有机系。 4.3　仪器设备 4.3.1　液相色谱 ⁃串联质谱仪 ：配电喷雾离子源 （ESI） 。 4.3.2　分析天平 ：精度为 0.01 g和0.01 mg。 4.3.3　pH计：精度为 0.01。 4.3.4　涡旋混合器 。 4.3.5　超声波清洗器 。 4.3.6　离心机：转速不低于 8 000 r/min。 4.3.7　氮吹仪。 4.3.8　固相萃取装置 。 4.4　样品 按照 GB/T 20195的规定制备试样 ，至少 200 g，粉碎使其全部过 0.425 mm试验筛，混合均匀 ，装 入密闭容器中 ，避光保存 ，备用。 4.5　试验步骤 注意：测定全过程避光操作 。 4.5.1　提取 平行做两份试验 。称取配合饲料 、浓缩饲料 、精料补充料试样 5 g，添加剂预混合饲料 、混合型饲料 添加剂试样 2 g（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL离心管中 ，准确加入 10 mL乙酸乙酯 （4.2.2） ，涡旋混合 1 min，超声提取 30 min，中间振摇 2次~3次，8 000 r/min离心 5min，取上清液置于另一 50 mL离心 管。残渣再准确加入 10 mL乙酸乙酯 （4.2.2） ，重复提取一次 ，合并两次提取液 ，混匀。准确移取 5 mL 提取液于 50 ℃下氮气吹干 ，准确加入 5 mL甲醇乙酸铵溶液 （4.2.8） ，超声 10 min，涡旋混匀 ，备用。 4.5.2　净化 向备用液 （4.5.1）中加入净化盐包 （4.2.16）1份、正己烷（4.2.3）5 mL，涡旋混匀 1 min，8 000 r/min 离心 10 min，取下层溶液 ，待固相萃取净化 。 2 GB/T 22261—2025 依次用 5 mL甲醇（4.2.4）和5 mL甲醇乙酸铵溶液 （4.2.8）活化固相萃取柱 （4.2.17），准确移取 4 mL上述下层溶液过柱 ，用5 mL 40%甲醇溶液 （4.2.9）淋洗，抽干。依次用 4 mL甲醇（4.2.4）和4 mL 乙腈（4.2.5）洗脱，收集全部洗脱液于 50 ℃下氮气吹干 ，准确加入 1 mL 40%乙腈溶液 （4.2.10）溶解残 渣，涡旋混合 1 min，过微孔滤膜 （4.2.18） ，待测。 4.5.3　测定 4.5.3.1　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 ： a）色谱柱：C18柱，柱长 50 mm，内径 2.1 mm，粒径 1.7 μm，或性能相当者 ； b）柱温：35 ℃； c）进样量：5 μL； d）流速：0.2 mL/min ； e）流动相：A相为 0.1 %甲酸溶液 （4.2.11） ，B相为 0.1 %甲酸乙腈溶液 （4.2.12） ，梯度洗脱程序 见表 1。 表1　梯度洗脱程序 时间 min 0 1.0 3.0 6.0 6.5 8.5 9.0 12.0A相 % 70 70 50 50 5 5 70 70B相 % 30 30 50 50 95 95 30 30 4.5.3.2　质谱参考条件 质谱参考条件如下 ： a）离子源：电喷雾离子源 （ESI） ，正离子多反应监测模式 （MRM） ； b）喷雾电压 ：3.0 kV； c）源温：150 ℃； d）雾化温度 ：500 ℃； e）雾化气流速 ：1 000 L/h； f）锥孔气流速 ：30 L/h； g）碰撞气：氩气。 多反应监测 （MRM）离子对、锥孔电压及碰撞能量参考值见表 2。 3 GB/T 22261—2025 表2　多反应监测 （MRM）离子对、锥孔电压及碰撞能量参考值 待测物名称 维吉尼亚霉素 M1 维吉尼亚霉素 S1 a 定量离子 。监测离子对 m/z 526.5>355.0a 526.5>108.9 824.8>205.0a 824.8>290.1锥孔电压 V 22 12碰撞能量 eV 18 34 52 36 4.5.3.3　标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下 ，分别取混合标准系列溶液 （4.2.15）和试样溶液 （4.5.2）上机测定 。维吉尼亚 霉素 M1和维吉