GB ICS 67.200.10 CCS X 14 中华人民共和国国家标准 GB/T24894—2025 代替GB/T24894—2010 动植物油脂 甘三酯分子 2-位脂肪酸组分的测定 Animalandvegetablefatsand oils- Determination of the composition offatty acids in the 2-position ofthetriglyceridemolecules (IS06800:1997,M0D） 2025-02-28发布 2025-09-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T24894—2025 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件代替GB/T24894一2010《动植物油脂甘三酯分子2-位脂肪酸组分的测定》，与GB/T24894 2010相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： 一更改了文件的适用范围（见第1章，2010年版的第1章）； 更改了部分试剂（见5.2,2010年版的4.2)； 一更改了部分仪器（见6.2，2010年版的5.2）； 更改了部分操作步骤（见9.4，2010年版的8.4）； 一更改了试验数据处理，增加了2-位脂肪酸组成的计算公式（见第10章，2010年版的第9章）； 更改了试验报告（见第12章，2010年版的第11章）； 删除了脂肪酶的制备和活性的测定（见2010年版的附录A）。 本文件修改采用ISO6800：1997《动植物油脂甘三酯分子2-位脂肪酸组分的测定》。 本文件与ISO6800：1997相比，做了下述结构调整： 一增加了“术语和定义”一章； 删除了ISO6800：1997中的10.1，以适应我国的技术条件，增加可操作性 本文件与ISO6800：1997的技术差异及其原因如下： 用规范性引用的GB5009.168一2016替换了ISO5508和ISO5509（见5.4、6.4、9.6），以和我 国的技术条件相适应； 用规范性引用的GB5009.229一2016替换了ISO660（见9.1），以和我国的技术条件相适应； 一更改了范围（见第1章），将文件的适用范围扩大到熔点低于50℃的含四个至二十二个碳原 子的饱和和不饱和脂肪酸的油脂； 更改了部分试剂（见5.2），以应用于甘三酯醇解法制备2-单甘酯； 更改了部分仪器（见6.2），以应用于甘三酯醇解法制备2-单甘酯； 更改了部分操作步骤（见9.4），以应用于甘三酯醇解法制备2-单甘酯； 更改了试验报告（见第12章），以和我国的技术条件相适应； 删除了附录A（规范性）脂肪酶的制备和活性的测定，更改为固定化脂肪酶并提供了酶活 参数。 本文件做了下列编辑性改动： 删除了实验室间测试结果（见ISO6800：1997的附录B）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由国家粮食和物资储备局提出。 本文件由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC270)归口。 本文件起草单位：江南大学、国家粮食和物资储备局科学研究院、河南工业大学、武汉轻工大学、丰 益（上海）生物技术研发中心有限公司。 本文件主要起草人：王兴国、韦伟、赵晨伟、金青哲、金俊、曾炜、刘玉兰、何东平、薛雅琳、段章群、 曹文明。 I GB/T24894—2025 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —2010年首次发布为GB/T24894—2010； 一本次为第一次修订。 II GB/T24894—2025 动植物油脂 甘三酯分子2-位脂肪酸组分的测定 1范围 本文件描述了动植物油脂中甘三酯分子2-位脂肪酸（β或内位）组分的测定方法。 本文件适用于熔点低于50℃的含四个至二十二个碳原子的饱和和不饱和脂肪酸的油脂 本文件不适用于含有下列组分的油脂： 含有少于四个碳原子的脂肪酸； 一含有多于二十二个碳原子的脂肪酸； 一含有羟基脂肪酸（如：葩麻油酸）。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB5009.168—2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 GB5009.229—2016 食品安全国家标准食品中酸价的测定 GB/T5524 动植物油脂扦样（GB/T5524—2008,ISO5555:2001,IDT） GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696：1987,IDT） GB/T15687 动植物油脂i 试样的制备（GB/T15687—2008,ISO661:2003,IDT) 术语和定义 3 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中游离脂肪酸中和后，经柱层析净化，用酶将甘三酯醇解成2-单甘酯，经薄层层析（TLC)分 离，用气相色谱测定脂肪酸组分含量。 5试剂 所有试剂均为分析纯。水为符合GB/T6682的二级水。 5.1 用于试样净化的试剂 5.1.12 2-丙醇或乙醇：95%（体积分数）。 5.1.2正已烷或石油醚：沸程范围30℃~60℃。 5.1.32-丙醇或乙醇：50%（体积分数）。 5.1.4氢氧化钠溶液：0.5mol/L。 5.1.5 酚酰溶液：1g酚酰溶于100mL95%（体积分数）乙醇中。 1 GB/T24894—2025 5.1.6 活化的中性氧化铝：用于柱层析。最近在260℃温度活化2h的中性氧化铝，达到活性I级，保 存在干燥器中。 5.1.7 氮气。 5.2 用于甘三酯醇解的试剂 5.2.1 无水乙醇，采用活化分子筛3A脱水72h以上，含水不超过700mg/L。 5.2.2 固定化南极假丝酵母脂肪酶B(CandidaantarcticaLipaseB，CAL-B）。储存在干燥的冰箱里。 5.3 用于分离2-单甘酯的试剂 5.3.1 乙醇：95%（体积分数）。 5.3.2 正已烷或石油醚：沸程范围30℃~60℃。 5.3.3 丙酮。 5.3.4 硅胶：含有黏合剂，用于薄层层析。 5.3.5 展开剂：正已烷或石油醚十乙醚十98%甲酸=70十30十1（体积分数）。 5.3.6 显示剂：2'，7'-二氯荧光黄乙醇溶液（2'，7'-Dichlorofluorescein）：2g/L。100mL溶液加1滴 1mol/L氢氧化钠溶液使呈微碱性 5.3.7 乙醚：不含过氧化物。 5.4 用于气相色谱分析2-单甘酯的试剂 按照GB5009.168一2016中第3章执行。 6仪器 6.1 用于试样净化的仪器 6.1.1 水浴锅：在30℃~40℃之间能恒温控制。 6.1.2 层析柱：用于层析分离，内径13mm、长400mm的玻璃管，配有烧结玻璃过滤板和活塞开关。 6.1.3 旋转蒸发器：配有250mL圆底烧瓶。 6.1.4 氮吹仪：提供氮气流。 6.1.5 分液漏斗：500mL。 6.1.6 圆底烧瓶：100mL。 6.2 用于甘三酯醇解的仪器 6.2.1 玻璃离心管：10mL，带有磨口玻璃塞 6.2.2 电动振荡器，恒温控制的培养箱或水浴箱，能够保持在（30℃～50℃）士0.5℃，以150r/min~ 180r/min速度振荡。 6.2.3 水浴锅：可恒温控制，温度保持在（30℃~50℃）士0.5℃ 6.2.4 磁性搅拌棒，聚四氟乙烯涂层，能够保持在150r/min～180r/min速度搅拌。 6.2.5 磁性搅拌盘，能够保持在150r/min180r/min速度搅拌。 6.2.6 玻璃过滤器：烧结玻璃的孔隙为16μm~40μm。 6.2.7 秒表。 6.3 用于分离2-单甘酯的仪器 6.3.1 展开槽：用于薄层层析，带有磨砂玻璃盖，适合于200mm×200mm玻璃板。 2 GB/T24894—2025 6.3.2 2涂布器：用于制备薄层层析板 6.3.3 玻璃板：200mm×200mm。 6.3.4 微量注射器：3μL/滴4μL/滴。 6.3.5 喷雾器：用于薄层层析板喷射显示剂。 6.3.6 微型刮铲：用于刮下薄层层析板上单甘酯谱带。 6.3.7 烘箱：保持温度103℃土2℃。 6.3.8 紫外光灯：检测薄层板上的谱带，波长254nm。 6.3.9 圆底烧瓶：25mL，配有磨口接头的1m长空气冷凝器。 6.3.10 锥形瓶：250mL，带有磨口玻璃塞。 6.3.11 锥形瓶：50mL。 6.3.12 干燥器：内有有效的干燥剂。 6.4用于气相色谱法分析2-单甘酯的仪器 按照GB5009.168—2016中第4章执行 7扦样 按照GB/T5524执行。 8 试样制备 按照GB/T15687制备试样。 9 试验步骤 9.1i 试样酸价的测定 试样酸价按照GB5009.229一2016测定。如果酸价不高于1.5mg/g，可按9.3直接通过氧化铝层 析柱净化试样；如果酸价高于1.5mg/g，先按9.2在有溶剂存在的情况下用氢氧化钠中和，然后按9.3 氧化铝层析柱净化试样。 9.2 氢氧化钠中和 将约10g的油样溶解于100mL正已烷或石油醚（5.1.2)中，转人分液漏斗（6.1.5）。加50mL2-丙 醇或乙醇（5.1.1）、几滴酚酸溶液（5.1.5），加入中和油样游离脂肪酸所需的氢氧化钠溶液（5.1.4)并超量 0.5%。用力振摇1min，加50mL蒸馏水再振摇，然后静置。分层后，弃去下层皂液和中间层（黏液和 不溶于水的物质）。逐次用25mL～30mL的2-丙醇或乙醇（5.1.3）清洗中和油脂的正已烷或石油醚， 直到酚酸的粉红色消失为止。 将溶液转