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ICS 65.02 B40 团 体 标 准 T/NAIA 005—2020 瘤胃液中挥发性脂肪酸的测定 气相色谱法 Determination of volatile fatty acids in rumen fluid Gas chromatography 2020-07-07 发布 2020-08-01 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 1前 言 本标准的编写格式符合 GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则 第 1 部分 标准的结构和编写》 规定编写。 本标准由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本标准由宁夏大学、宁夏饲料工程技术研究中心、宁夏兽药饲料监察所、宁夏昊标检测服 务研究院、宁夏化学分析测试协会起草。 本标准主要起草人:辛国省、卜姣姣、佐婷婷、刘辉、燕翀、杨仪、丁园、高巧仙、武晓 宏、谢荣国、张小飞、王京、杨洁。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 2瘤胃液中挥发性脂肪酸的测定 气相色谱法 1 范围 本标准规定了瘤胃液中挥发性脂肪酸的测定气相色谱法。 本标准适用于瘤胃液中挥发性脂肪酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过在本标准中的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有的修改单 (不包括勘误的内容 )或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准 达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本 适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 3 原理 利用挥发性脂肪酸易溶于水的特点,用偏磷酸除去可溶性蛋白质,直接进样,用外标法定 量测定挥发性脂肪酸的含量。 4 试剂与材料 4.1 偏磷酸。 4.2 乙酸。 4.3 丙酸。 4.4 丁酸。 4.5 戊酸。 4.6 异戊酸。 4.7 25%偏磷酸溶液:称取 25g溶于100mL水中。 4.8 4.8 标准储备液:称取乙酸( 4.2)1250mg、丙酸( 4.3)750mg、丁酸( 4.4)500mg、戊 酸(4.5)500mg、异戊酸( 4.6)500mg 标准品(均为色谱纯或更高级别 ),用水定容至 250mL, 浓度分别为 5mg∕mL、3mg∕mL、2mg∕mL、2mg∕mL、2mg∕mL。置于 4℃冰箱保存,有效期为 3个月。 5 仪器和设备 5.1 分析天平:感量 0.0001g。 全国团体标准信息平台 35.2 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器( FID)。 5.3 高速台式离心机。 5.4 漩涡振荡器。 6 瘤胃液的采集与保存 瘤胃液的采集在晨饲前进行,方法有两种,一种是通过瘤胃瘘管进行采集,另一种是采用特定的 胃管通过食道插入瘤胃进行采集。将采集好的瘤胃液用 4层纱布过滤装入离心管或其他相当的容器封口 后放入液氮或 -80℃冰箱保存。 7 测定步骤 7.1 试样制备与保存 取经4层纱布过滤后的瘤胃液 1.00mL,置于离心管中,加入 25%的偏磷酸溶液 200μL,涡旋混匀摇 匀,10000r∕min离心10min,上清液经 0.45μm滤膜过滤装人进样小瓶待测。 7.2 色谱条件 色谱柱: DB-FFAP毛细管柱( 30m×0.32mm×0.25μm),或性能相当; 柱温:程序升温,初始温度 60℃,以12.5℃/min速率升至 190℃,保持 1min; 进样口温度: 220℃; 检测器温度: 280℃; 载气:高纯氮气; 恒压:100KPa; 空气流量: 400mL/min; 氢气流量: 40mL/min; 尾吹气流量: 25mL/min; 分流进样方式: 分流比为 30:1; 进样量: 1μL。 7.3 标准系列溶液 准确吸取混合储备液( 4.8)0.00mL、2.50mL、5.00mL、10.0mL、20.0mL、40.0mL、50.0mL用水定 容至100mL,配制成相应的上机浓度 (μg/mL)。 7.4 测定 按照7.2给出参考色谱条件,依次上机测定标准系列溶液和试样溶液。 7.5 标准曲线绘制 试样溶液与标准溶液中各挥发性脂肪酸保留时间(相对偏差在± 2.5%之内)。线性范围内,以各 挥发性脂肪酸浓度为横坐标,以其响应值(峰面积)为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线相关系数不 低于0.99。 全国团体标准信息平台 48 分析结果的计算 按式(1)计算试样中的各挥发性脂肪酸含量 w,其数值用μ g/mL表示。 mvcμg/mL) ( w )1( 式中: C—标准曲线下查得各挥发性脂肪酸浓度 (μg/mL); V—试样定容体积 (mL); m—试样量(mL)。 9 允许差 在重复性条件下,完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于 5%。 _________________________________ 全国团体标准信息平台
T-NAIA 005—2020 瘤胃液中挥发性脂肪酸的测定 气相色谱法
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