ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T17811—2025 代替GB/T17811—2008 动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶 消化率的测定 过滤法 Determinationofpepsindigestibilityforanimal-derivedproteinfeeds— Filtrationmethod 2025-08-01发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T17811—2008《动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定 过滤法》,与 GB/T17811—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 增加了“术语和定义”一章(见第3章); b) 增加了胃蛋白酶的CAS号和来源(见5.4); c) 更改了脱脂用试剂(见8.1,2008年版的7.1); d) 更改了脱脂要求(见8.1,2008年版的7.1); e) 更改了消化残渣处理用试剂(见8.3,2008年版的7.3); f) 增加了未消化粗蛋白质含量的测定计算公式(见第9章); g) 更改了精密度要求(见第10章,2008年版的第8章); h) 增加了胃蛋白酶活性测定方法(见附录A)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:山东新希望六和集团有限公司、通威农业发展有限公司、国粮武汉科学研究设计 院有限公司、新希望六和股份有限公司。 本文件主要起草人:杨青、谢庚楠、张凤枰、刘小敏、王琳、罗福星、韩肖惠、王博媛、董秀洪、禹爱兵、 郭团结、于平、徐绍华、李小波、张璐、杨发树、杜言。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———1999年首次发布为GB/T17811—1999,2008年第一次修订; ———本次为第二次修订。 ⅠGB/T17811—2025 动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶 消化率的测定 过滤法 1 范围 本文件描述了动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定方法。 本文件适用于动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T6433 饲料中粗脂肪的测定 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率 pepsindigestibilityforanimal-derivedproteinfeeds 在45℃、pH1~2条件下,动物源性蛋白质饲料经20U/mL胃蛋白酶溶液消化16h,已消化粗蛋 白质占粗蛋白质的比值。 注:动物源性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率与体内消化率没有直接关系。 4 原理 试样在规定条件下用胃蛋白酶消化,分离不溶性残渣,测定残渣中未消化粗蛋白质含量及试样的粗 蛋白质含量,计算得出胃蛋白酶消化率。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,三级。 5.2 石油醚:沸程30℃~60℃。 5.3 无水乙醇。 5.4 胃蛋白酶:来源于猪胃,CAS号为9001-75-6,按附录A测定酶活。 5.5 盐酸溶液:移取6.1mL盐酸,用水稀释至1000mL(pH1~2),混匀。 1GB/T17811—2025 5.6 胃蛋白酶溶液(20U/mL):称取适量的胃蛋白酶(5.4),用在水浴锅(6.5)中加热至42℃~45℃的 盐酸溶液(5.5)溶解,使溶液中胃蛋白酶酶活浓度为20U/mL。临用现配。 5.7 滤纸:快速。 6 仪器设备 6.1 分析天平:精度0.1mg。 6.2 恒温摇床:控温精度±1℃,转速15r/min~300r/min。 6.3 电热鼓风干燥箱:控温精度±2℃。 6.4 布氏漏斗:直径100mm。 6.5 水浴锅:控温精度±1℃。 7 样品 按GB/T20195制备样品,至少200g。固体样品粉碎使其全部通过0.84mm孔径的试验筛,充分 混匀,装入密闭容器中,保存,备用。 8 试验步骤 8.1 脱脂 称取5g试样,用石油醚按照GB/T6433中抽提方法脱脂,脱脂后试样于室温风干。 8.2 消化 平行做两份试验。称取1g(精确至0.1mg)脱脂后试样(8.1),置于250mL具塞磨口瓶中,加入 150mL预先加热至45℃的胃蛋白酶溶液(5.6),使试样完全浸没其中,盖紧瓶塞,于45℃±1℃的恒 温摇床(6.2)上振摇消化16h。 8.3 消化残渣处理 从恒温摇床上取下磨口瓶,斜放静置15min以上,用铺有快速滤纸的布氏漏斗(6.4)抽滤,先用少 量水将瓶塞上的残渣洗至布氏漏斗上,再将瓶口保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上,慢慢倾出内容 物,期间避免残渣搅动。当上层液体通过滤纸后,用15mL无水乙醇(5.3)洗涤磨口瓶,将残渣转移至 布氏漏斗上,重复操作3次,确保残渣转移完全。当全部液体通过滤纸后,以少量无水乙醇洗涤残渣 2次。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸,包好,转移到托盘中,置于电热鼓风干燥箱内105℃烘 干。同时按8.2、8.3做空白试验,获得酶液空白。 8.4 未消化粗蛋白质含量测定 按GB/T6432规定测定残渣(8.3)中粗蛋白质含量(w1),以酶液空白(8.3)为滴定空白,计算未消 化粗蛋白质含量。 8.5 试样中粗蛋白质含量测定 按GB/T6432规定测定脱脂后试样(8.1)中粗蛋白质含量(w2)。 2GB/T17811—2025 9 试验数据处理 试样中未消化粗蛋白质含量以质量分数w1计,数值以%表示,按公式(1)计算: w1=(V-V0)×c×6.25×14 m1×1000×100…………………………(1) 式中: V ———滴定试样消化液所消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); V0———酶液空白(8.3)消耗盐酸标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); c———盐酸标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L); 6.25———氮换算成粗蛋白质的平均系数; 14———氮的摩尔质量,单位为摩尔每升(g/mol); m1———脱脂后试样(8.2)的质量,单位为克(g); 1000———换算系数。 试样中胃蛋白酶消化率X1,数值以%表示,按公式(2)计算: X1=w2-w1 w2×100 …………………………(2) 式中: w2———脱脂后试样中粗蛋白质的质量分数,%; w1———脱脂后试样中未消化粗蛋白质的质量分数,%。 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下,获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不超过该算术平均值 的2%。 3GB/T17811—2025 附 录 A (规范性) 胃蛋白酶活性测定 A.1 原理 在一定的温度和pH条件下,蛋白酶水解血红蛋白底物产生酪氨酸,根据酶解产生的酪氨酸的量计 算蛋白酶活力。 注:在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1mol酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力的单位(U)。 A.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 A.2.1 水:GB/T6682,三级。 A.2.2 盐酸溶液Ⅰ:量取83.3mL盐酸,置于1000mL容量瓶中,用水定容,混匀。 A.2.3 盐酸溶液Ⅱ:量取65mL盐酸溶液Ⅰ(A.2.2),置于1000mL容量瓶中,用水定容,混匀。 A.2.4 三氯乙酸溶液(5%):称取50g三氯乙酸,置于1000mL容量瓶中,用水溶解并定容,混匀。 A.2.5 血红蛋白溶液:称取生化级牛血红蛋白1g,加盐酸溶液Ⅱ(A.2.3)溶解并定容至100mL,混匀。 2℃~8℃保存,有效期2d。 A.2.6 酪氨酸标准溶液(0.5mg/mL):称取酪氨酸标准品(CAS号:70642-86-3,纯度不低于99.0%) 12.5mg(精确至0.01mg),置于25mL容量瓶中,用盐酸溶液Ⅱ(A.2.3)溶解并定容,混匀。 A.3 仪器设备 A.3.1 分析天平:精度0.1mg、精度0.01mg。 A.3.2 恒温水浴锅:控温精度±0.5℃。 A.3.3 紫外分光光度计:波长精度±1nm。 A.4 试验步骤 A.4.1 胃蛋白酶溶液制备 称取胃蛋白酶试样适量(精确至0.1mg),用盐酸溶液Ⅱ(A.2.3)溶解,定容,制成酶活浓度为 0.2U/mL~0.4U/mL的溶液。 A.4.2 测定 取25mL试管6支,其中3支试管各准确加入酪氨酸标准溶液(A.2.6)1mL,另3支试管各准确加 入胃蛋白酶溶液(A.4.1)1mL,置于37℃±0.5℃恒温水浴锅(A.3.2)中,保温5min,准确加入预热至 37℃的血红蛋白溶液(A.2.5)5mL,摇匀,37℃±0.5℃反应10min,然后立即准确加入三氯乙酸溶液 (A.2.4)5mL,摇匀,过滤,取滤液备用。 另取25mL试管2支,分别准确加入血红蛋白溶液(A.2.5)5mL,置于37℃±0.5℃恒温水浴锅 (A.3.2)中,10min后,立即加入三氯乙酸溶液(A.2.4)5mL,然后向1支试管中准确加入胃蛋白酶溶液 (A.4.1)