ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T19542—2025 代替GB/T19542—2007,GB/T8381.10—2005 饲料中磺胺类药物的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofsulfonamidesinfeeds— Liquidchromatography-tandemmassspectrometry 2025-08-01发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T19542—2007《饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法》和GB/T8381.10— 2005《饲料中磺胺喹 啉的测定 高效液相色谱法》。本文件以GB/T19542—2007为主,整合了 GB/T8381.10—2005的内容。本文件与GB/T19542—2007相比,除结构调整和编辑性改动外,主要 技术变化如下: a) 更改了适用范围和定量限、增加了磺胺类药物的种类(见第1章,2007年版的第1章); b) 更改了原理(见第4章,2007年版的第3章); c) 更改了试验步骤(见第8章,2007年版的第7章); d) 更改了试验数据处理(见第9章,2007年版的第8章); e) 更改了精密度的要求(见第10章,2007年版的第9章)。 请注意本文件某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、河南中标检测服务有限公司、 山东晟华检测技术有限公司、广州汇标检测技术中心。 本文件主要起草人:索德成、樊霞、赵月钧、肖志明、郝燕娟、安志新、贾松涛、唐建、张晓、王智民、 李梦雨、张冰、陶燕、管琳、王石。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为: ———GB/T8381.10,2005年首次发布; ———GB/T19542,2004年首次发布,2007年第一次修订,本次为第二次修订,并入GB/T8381.10— 2005的内容。 ⅠGB/T19542—2025 饲料中磺胺类药物的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件描述了饲料中29种磺胺类药物液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂和饲料原料 中磺胺米隆、磺胺胍、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、二甲氧苄氨嘧 啶、磺胺甲嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、二甲 氧甲基苄胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲 唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二 甲异 唑、磺胺苯酰、磺胺苯吡唑、磺胺氯吡嗪、磺胺吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹 啉、磺胺硝苯的 测定。 本文件中方法检出限为0.03mg/kg,定量限为0.1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中待测物经甲酸乙腈溶液提取后,经多重杂质吸附材料净化,液相色谱-串联质谱仪检测,基质 添加标准曲线校准,外标法定量。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,一级。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯。 5.4 0.1%甲酸溶液:取甲酸(5.3)0.1mL,加入100mL水中,混匀。 5.5 提取溶液:取甲酸10mL,加入乙腈990mL,混匀。 5.6 稀释溶液:取甲酸0.1mL和甲醇10mL,加入90mL水,混匀。 1GB/T19542—2025 5.7 标准储备溶液:精密称取29种磺胺类标准品(纯度不低于97%,相关信息见附录A)10mg(精确 至0.01mg)分别置于10mL棕色容量瓶中,用甲醇配成质量浓度约为1mg/mL的标准储备溶液, -18℃以下保存,有效期6个月。或购买标准溶液。 5.8 混合标准中间溶液:准确移取适量标准储备溶液(5.7)分别至棕色容量瓶中,用甲醇配成浓度约为 100μg/mL的中间溶液,2℃~8℃保存,有效期1个月。 5.9 标准系列工作溶液:分别吸取混合标准中间液(5.8),用稀释溶液(5.6)稀释成质量浓度为200ng/mL、 400ng/mL、800ng/mL、2000ng/mL、4000ng/mL、8000ng/mL的标准系列工作工作液。临用现配。 5.10 滤膜:0.22μm,有机系。 5.11 强阴离子交换(SAX)填料:粒径40μm,或性能相当者。 5.12 十八烷基硅烷键合硅胶(C18)填料:粒径50μm,或性能相当者。 5.13 弗洛里硅土:粒径50μm,或性能相当者。 5.14 多重杂质吸附材料:称取10gSAX填料(5.11)、15gC18填料(5.12)、15g弗洛里硅土(5.13)于 100mL试剂瓶中,混匀,备用。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾电离源(ESI+)。 6.2 天平:精度为0.01g和0.01mg。 6.3 离心机:转速不低于8000r/min。 6.4 涡旋振荡器。 6.5 超声波清洗器。 6.6 氮吹仪。 7 样品 按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛,充分混匀,装入 密闭容器中,备用。选取类型相同,均匀一致、且在待测物保留时间处,仪器响应值小于方法定量限 30%的饲料样品,作为空白样品。 8 试验步骤 8.1 提取 称取配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、饲料原料试样5g,添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂试 样2g(精确至0.01g),置于50mL离心管中,准确加入20mL提取溶液(5.5),涡旋混合30s,超声提取 30min,其间每10min振摇一次,8000r/min离心5min,取上清液,备用。 8.2 净化 准确移取5mL备用液(8.1)于10mL离心管中,加入100mg多重杂质吸附材料,涡旋混合30s, 于10000r/min离心2min。将上清液转移至10mL离心管中,40℃氮气吹干,加入1.0mL稀释溶液 (5.6),涡旋混合30s,过0.22μm滤膜,上机测定。 8.3 基质标准系列溶液的制备 分别称取7份空白样品(配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、饲料原料5g,添加剂预混合饲料、混合 2GB/T19542—2025 型饲料添加剂2g)于50mL离心管中,分别添加0.1mL混合标准系列工作溶液,配制成不同上机浓度 (5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)的基质添加标准曲线。按8.1和 8.2处理,供液相色谱-串联质谱仪测定。 8.4 测定 8.4.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下。 a) 色谱柱:C18,柱长100mm,内径3.0mm,粒径1.7μm,或性能相当者。 b) 柱温:30℃。 c) 进样量:10μL。 d) 流动相及流速流动相:A相为0.1%甲酸溶液(5.4),B相为0.1%甲酸甲醇溶液(5.6),梯度洗脱 程序见表1。 表1 流动相梯度条件 时间 min流速 mL/minA相(体积分数) %B相(体积分数) % 0 0.3 90 10 1 0.3 90 10 3.5 0.3 75 25 6.5 0.3 70 30 8 0.3 20 80 9 0.3 10 90 9.1 0.3 90 10 10 0.3 90 10 8.4.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下。 a) 电离方式:电喷雾离子源。 b) 扫描方式:正离子模式。 c) 检测方式:多反应监测。 d) 喷雾电压:5000V。 e) 雾化温度:320℃。 f) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体,使用前应调节各气体流量以使质谱 灵敏度达到检测要求。 g) 毛细管电压、解离电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度。定性离子对、定量离子对及 对应的解离电压和碰撞能量见表2。 3GB/T19542—2025 表2 定性离子对、定量离子对及对应的解离电压和碰撞能量的参考值 序号 待测物名称参考出峰时间 min离子对 m/z解离电压 V碰撞能 eV 1 磺胺米隆 1.42187.0>76.6 187.0>105.8a1316 12 2 磺胺胍 1.82215.0>92.0 215.0>108.0a1224 14 3 磺胺 2.08173.0>92.0 173.0>156.0a2224 14 4 磺胺醋酰 2.85215.0>92.0 215.0>108.0a1224 14 5 磺胺二甲异嘧啶 3.05279.0>124.0 279.0>186.0a1220 14 6 磺胺嘧啶 3.09251.0>92.0 251.0>155.9a1224 14 7 磺胺噻唑 3.25256.0>92.0 256.0>155.9a1224 14 8 磺胺吡啶 3.52250.0>92.0 250.0>156.0a1224 14 9 二甲氧苄氨嘧啶 3.62261.1>123.1a 261.1>245.22035 22