ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T23741—2025 代替GB/T20363—2006、GB/T23741—2009 饲料中巴比妥类药物的测定 Determinationofbarbituratesinfeeds 2025-08-01发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T20363—2006《饲料中苯巴比妥的测定》、GB/T23741—2009《饲料中4种巴比妥 类药物的测定》,与GB/T20363—2006、GB/T23741—2009相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技 术变化如下: a) 更改了适用范围、液相色谱-串联质谱法的定量限(见第1章,GB/T20363—2006的第1章、 GB/T23741—2009的第1章); b) 删除了GC-MS法(见GB/T20363—2006的第4章); c) 更改了原理(见4.1和5.1,GB/T20363—2006的3.1、GB/T23741—2009的第3章); d) 更改了试验步骤(见4.5和5.5,GB/T20363—2006的3.5、GB/T23741—2009的第7章); e) 更改了试验数据处理(见4.6和5.6,GB/T20363—2006的3.6、GB/T23741—2009的8.4和 9.8)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:山东省畜产品质量安全中心、国粮武汉科学研究设计院有限公司、梅里埃检测技 术(青岛)有限公司。 本文件主要起草人:孙延军、张芸、兰凤洁、王博媛、杜言、李俊玲、陈贝贝、张坤、王暖霞、张玮、张超、 张博文、晁娟娟、赵学峰、吴立国、刘霄飞、李会荣、王英英。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———GB/T20363,2006年首次发布为GB/T20363—2006; ———GB/T23741,2009年首次发布为GB/T23741—2009; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T23741—2025 饲料中巴比妥类药物的测定 1 范围 本文件描述了饲料中巴比妥类药物的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中巴比妥、 苯巴比妥、仲丁巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥的测定。 本文件液相色谱-串联质谱法的检出限为0.01mg/kg,定量限为0.03mg/kg;高效液相色谱法的检 出限为0.5mg/kg,定量限为1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 液相色谱-串联质谱法 4.1 原理 试样中的待测物经乙腈提取,固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱仪测定,内标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水:GB/T6682,一级。 4.2.2 甲醇:色谱纯。 4.2.3 乙腈:色谱纯。 4.2.4 甲酸:色谱纯。 4.2.5 乙酸铵:色谱纯。 4.2.6 硫酸钠。 4.2.7 氯化钠。 4.2.8 乙酸铵溶液(0.005mol/L):称取0.19g乙酸铵(4.2.5),用水溶解,转移至500mL容量瓶中,定 容,混匀。 4.2.9 复溶液:移取200mL乙腈(4.2.3)于1000mL容量瓶中,加入2mL甲酸(4.2.4),用水稀释、定 容,混匀。 1GB/T23741—2025 4.2.10 标准储备溶液(1mg/mL):准确称取巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥和 仲丁巴比妥标准品(CAS号等信息见附录A,纯度均不低于99.0%)各10mg(精确至0.01mg),分别置 于10mL容量瓶中,用甲醇(4.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。或购买有证标 准溶液。 4.2.11 混合标准中间溶液Ⅰ(10μg/mL):分别准确移取标准储备溶液(4.2.10)各0.1mL于10mL容 量瓶中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期1个月。 4.2.12 混合标准中间溶液Ⅱ(1μg/mL):准确移取1mL混合标准中间溶液Ⅰ(4.2.11)于10mL容量 瓶中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。临用现配。 4.2.13 内标混合储备溶液(1mg/mL):准确称取戊巴比妥-d5、苯巴比妥-d5和异戊巴比妥-d5标准品 (CAS号等信息见附录A,纯度均不低于99.0%)各10mg(精确至0.01mg),置于10mL容量瓶中,用 甲醇(4.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。 4.2.14 内标混合中间溶液(10μg/mL):准确移取0.1mL内标混合储备溶液(4.2.13)于10mL容量瓶 中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期1个月。 4.2.15 内标混合工作溶液(1μg/mL):准确移取1mL内标混合中间溶液(4.2.14)于10mL容量瓶 中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。临用现配。 4.2.16 混合标准系列溶液:准确移取适量混合标准中间溶液Ⅱ(4.2.12)及100μL内标混合工作溶液 (4.2.15)于10mL容量瓶中,用复溶液(4.2.9)稀释、定容,混匀,配制成质量浓度分别为0.01μg/mL、 0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL和内标质量浓度均为0.01μg/mL的混合标准系列溶 液。临用现配。 4.2.17 固相萃取小柱:填料为N-丙基乙二胺(PSA),硅胶键合三官能十八烷基(C18)、合成石墨化炭 黑(CarbonS)和增强型脂肪去除吸附剂(EMR-Lipid),595mg/6mL,或性能相当者。 4.2.18 微孔滤膜:0.22μm,有机系。 4.3 仪器设备 4.3.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 4.3.2 分析天平:精度0.01g和0.01mg。 4.3.3 涡旋混合器。 4.3.4 高速离心机:转速不低于10000r/min。 4.3.5 固相萃取装置。 4.3.6 氮吹仪。 4.4 试样制备 按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛,混合均匀,装入 密闭容器中,备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 提取 平行做两份试验。称取试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中,准确加入0.02mL内标混合工 作溶液(4.2.15)和10mL(V1)乙腈(4.2.3),涡旋5min,10000r/min离心5min,上清液备用。 4.5.2 净化 取全部上清液(4.5.1)于50mL离心管中,加入3mL水,涡旋1min。加入4g硫酸钠(4.2.6)、1g 2GB/T23741—2025 氯化钠(4.2.7),涡旋1min,10000r/min离心5min。准确取上清液5mL(V2)过固相萃取小柱 (4.2.17),收集滤液,于40℃氮吹至近干,准确加入1mL(V3)复溶液(4.2.9),涡旋1min,过微孔滤膜 (4.2.18),滤液待测。 4.5.3 测定 4.5.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,柱长100mm,内径2.1mm,粒径1.8μm,或性能相当者; b) 柱温:40℃; c) 进样量:2μL; d) 流速:0.3mL/min; e) 流动相:A相为0.005mol/L乙酸铵溶液(4.2.8),B相为乙腈(4.2.3),梯度洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 时间 minA相(体积分数) %B相(体积分数) % 0.00 75 25 7.00 70 30 7.01 0 100 8.50 0 100 8.51 75 25 9.50 75 25 4.5.3.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下: a) 离子源:电喷雾离子源; b) 扫描方式:负离子扫描; c) 检测方式:多反应监测(MRM); d) 离子源温度:450℃。 多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量见表2。 表2 多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量 被测物名称定性离子对 m/z定量离子对 m/z碰撞能量 eV 巴比妥183.0>42.0 183.0>140.0183.0>42.038 17 苯巴比妥231.0>42.1 231.0>85.1231.0>42.142 18 3GB/T23741—2025 表2 多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量(续) 被测物名称定性离子对 m/z定量离子对 m/z碰撞能量 eV 戊巴比妥225.2>42.1 225.2>182.2225.2>42.142 18 异戊巴比妥225.2>42.1 225.2>182.2225.2>42.142 17 司可巴比妥237.1>42.1 237.1>194.3237.1>42.144 17 仲丁巴比妥211.2>168.2 211.2>42.1211.2>168.