ICS71.100.70 CCSY42 中华人民共和国国家标准 GB/T46257—2025 化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofacetylcholineanditssaltsincosmetics— Liquidchromatography-tandemmassspectrometry 2025-08-29发布 2026-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国轻工业联合会提出。 本文件由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本文件起草单位:中国质量检验检测科学研究院、南通大学、谱尼测试集团股份有限公司、三亚中国 检科院生物安全中心、南京师范大学、北京理工大学。 本文件主要起草人:孟宪双、马强、史传国、杨柏崇、邱月明、南倩、吴丽娜、蔡璐璐、白桦、翟雁冰、 吕庆、席广成、张庆、吕悦广、尚宇瀚。 ⅠGB/T46257—2025 引 言 本文件的被测物质是我国《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定的禁用原料。 禁用原料是指不得作为化妆品原料使用的物质。《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定“若技术 无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时,国家有限量规定的应符合其规定;未规定限量的,应进行安 全性风险评估,确保在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。” 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本文件的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 ⅡGB/T46257—2025 化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定 液相色谱-串联质谱法 警示———使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问 题,使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本文件描述了化妆品中乙酰胆碱及其盐类的液相色谱-串联质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪 器设备、试样制备和试验步骤、试验数据处理、回收率、精密度和试验报告等内容。 本文件适用于水剂类、膏霜类、乳液类和油剂类化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定。 本文件中乙酰胆碱及其盐类(以乙酰胆碱计)的方法检出限为0.05mg/kg,定量限为0.1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样经50%乙腈溶液涡旋振荡,超声提取,正己烷除脂,离心、过滤后,得到目标物待测溶液。将目 标物待测溶液注入液相色谱-串联质谱仪,采用液相色谱分离,质谱检测器检测,保留时间和质谱的相对 离子丰度定性,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有规定,所用试剂均为分析纯。 5.1 水,GB/T6682,一级。 5.2 乙腈:色谱纯。 5.3 乙酸:色谱纯。 5.4 正己烷:色谱纯。 5.5 乙酸铵。 5.6 乙酰胆碱标准样品/标准物质:纯度不小于99.0%,标准样品/标准物质的英文名称、CAS号、分子 式、相对分子质量和化学结构式见附录A中表A.1。 1GB/T46257—2025 5.7 50%乙腈溶液:量取50mL乙腈(5.2)置于100mL容量瓶中,加入水并定容至刻度,得到50%乙 腈水溶液(体积分数)。 5.8 乙酰胆碱标准储备液(ρ=100mg/L):用分析天平称取乙酰胆碱标准样品/标准物质(5.6)0.01g (精确至0.001g)至100mL容量瓶中,用50%乙腈溶液(5.7)溶解并定容至刻度,于4℃避光保存,可使 用3个月。 5.9 微孔滤膜:0.22μm,有机相。 6 仪器设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS):配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:精确度为0.001g和0.0001g。 6.3 超声波清洗器:工作频率不低于40kHz。 6.4 离心机:转速不低于8000r/min。 6.5 具塞比色管:25mL。 6.6 容量瓶:50mL和100mL。 6.7 具塞聚四氟乙烯塑料离心管:15mL。 6.8 涡旋振荡器。 7 试样制备和试验步骤 7.1 试样制备 7.1.1 取样 取样前应将试样充分混匀。水剂类、油剂类化妆品将试样摇匀后取样;膏霜类、乳液类化妆品将试 样挤出、混匀后取样。 7.1.2 水剂类化妆品 称取0.5g(精确至0.001g)试样,置于25mL具塞比色管(6.5)中,加入2mL50%乙腈溶液(5.7), 用涡旋振荡器(6.8)涡旋分散均匀,继续加入8mL50%乙腈溶液(5.7),在超声波清洗器(6.3)中超声提 取20min,冷却至室温;将样液转移至15mL具塞聚四氟乙烯塑料离心管(6.7)中,8000r/min离心 10min,取部分上清液,经0.22μm微孔滤膜(5.9)过滤后,滤液作为试样溶液备用。 7.1.3 膏霜、乳液和油剂类化妆品 称取0.5g(精确至0.001g)试样,置于25mL具塞比色管(6.5)中,加入2mL50%乙腈溶液(5.7), 用涡旋振荡器(6.8)涡旋分散均匀,再加入2mL正己烷(5.4)和8mL50%乙腈溶液(5.7),涡旋振荡 1min,在超声波清洗器(6.3)中超声提取20min,冷却至室温;弃去上层正己烷,吸取下层样液至15mL 具塞聚四氟乙烯塑料离心管(6.7)中,8000r/min离心10min,经0.22μm微孔滤膜(5.9)过滤后,滤液 作为试样溶液备用。 7.2 试验步骤 7.2.1 液相色谱参考工作条件 液相色谱参考工作条件如下: a) 色谱柱:亲水相互作用色谱(HILIC)柱,1.7μm(粒径),100mm×2.1mm(内径),或性能相 2GB/T46257—2025 当者; b) 流动相:A相为10mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%乙酸),B相为乙腈,梯度洗脱条件见表1; c) 流速:0.3mL/min; d) 柱温:30℃; e) 进样量:2μL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 minA %B % 0 5 95 2.0 5 95 4.0 40 60 6.0 40 60 6.1 5 95 8.0 5 95 7.2.2 质谱参考工作条件 质谱参考工作条件如下: a) 离子源:电喷雾离子源(ESI); b) 扫描方式:正离子扫描; c) 毛细管电压:3.2kV; d) 离子源温度:150℃; e) 脱溶剂气:氮气,流速1000L/h,温度500℃; f) 锥孔气:氮气,流速50L/h; g) 碰撞气:氩气; h) 扫描模式:多反应监测; i) 乙酰胆碱及其盐类的保留时间、母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量参数见表2。 表2 乙酰胆碱及其盐类的保留时间及质谱分析参数 化合物保留时间 min母离子 m/z子离子 m/z锥孔电压 V碰撞能量 eV 乙酰胆碱及其盐类 4.9 146 87a,60 28 15,10 a定量离子。 7.2.3 标准工作曲线的绘制 用50%乙腈溶液(5.7)将乙酰胆碱标准储备液(5.8)逐级稀释得到质量浓度为200ng/mL、100ng/mL、 50ng/mL、20ng/mL、10ng/mL和5ng/mL的系列标准工作溶液,按7.2.1和7.2.2测定条件浓度由 低到高进样测定,以浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标作图,得到标准工作曲线回归方程。 乙酰胆碱标准溶液的多反应监测色谱图见附录B中图B.1。 3GB/T46257—2025 7.2.4 试样测定 按液相色谱和质谱参考工作条件(7.2.1和7.2.2)测定试样溶液(7.1),如果检出色谱峰的保留时间 与标准样品/标准物质的一致(偏差在±2.5%之间),并且在扣除背景后的试样质谱图中,定性离子和定 量离子均出现,且其相对离子丰度与浓度相近的标准样品/标准物质的相对离子丰度进行比较,相对标 准偏差不超过表3规定的范围,可判定试样中含有乙酰胆碱或其盐类。记录定量离子色谱峰的峰面积, 以外标法定量。试样溶液中乙酰胆碱及其盐类的响应值(以乙酰胆碱计)应在标准曲线范围之内,超出 线性范围的试样溶液可用50%乙腈溶液(5.7)稀释后进行测定。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K/% K>50 20<K≤50 10<K≤20 K≤10 最大允许偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.3 空白试验 除不称取试样外,均按7.1~7.2的步骤进行。 8 试验数据处理 试样中乙酰胆碱及其盐类的含量(以乙酰胆碱计),按公式(1)计算: w=ρ×V m×1000×k …………………………(1) 式中: w ———试样中乙酰胆碱及其盐类的含量(以乙酰胆碱计),单位为毫克每千克(mg/kg); ρ———从标准工作曲线上得到的试样溶液中乙酰胆碱的质量浓度(应扣除空白值),单位为纳克 每毫升(ng/mL); V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); m———试样的质量,单位为克(g); 1000———换算系数,单位毫克每克(mg/g); k———超过线性范围的稀释倍数。 计算结果保留两位有效数字。 9 回收率 在添加浓度为0.1mg/kg~10mg/kg的范围内,回收率在80%~115%之间。