ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T46948—2025 植物病原微生物检测方法评价通则 Generalprinciplesforevaluationofdetectionmethodsforplant pathogenicmicroorganisms 2025-12-31发布 2026-07-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本文件起草单位:中国质量检验检测科学研究院、三亚中国检科院生物安全中心、农业农村部科技 发展中心、国家粮食和物资储备局科学研究院、中国测试技术研究院生物研究所。 本文件主要起草人:田茜、赵文军、蔡璐璐、付伟、徐晗、刘钊、周李华。 ⅠGB/T46948—2025 植物病原微生物检测方法评价通则 1 范围 本文件规定了植物病原微生物定性分子检测方法商品化前的评价要求和评价报告,确立了评价程 序,描述了评价方法。 本文件适用于植物病原微生物定性分子检测方法商品化前的性能评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T27025 检测和校准实验室能力的通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 参考方法 referencemethod 由国际或国内权威组织推荐的用于检测某种或几种植物病原微生物的经典实验方法。 注:本文件中主要指国际、区域、国家或行业发布的,经过严格确认的、公认的方法。 3.2 特异性 specificity 能准确、特异地测定目标微生物的能力,即能将靶标微生物与其他非靶标微生物区分开来的能力。 注:包括包容性和排他性。 3.3 包容性 inclusivity 能准确测定目标微生物群体中不同个体的能力。 3.4 排他性 exclusivity 能准确区分目靶标生物与非靶标微生物的能力,即避免非靶标微生物干扰的能力。 3.5 灵敏度 sensitivity 样品中检测靶标能够被准确检测出的最小量。 注:即最低检测限。 3.6 重复性 repeatability 在同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按相同的测试方法,在短时间内对同一被测对象相互 独立进行的测试条件下,独立测试结果间的一致程度。 1GB/T46948—2025 3.7 再现性 reproducibility 在不同实验室,由不同操作者使用不同设备,按相同的测试方法,对同一被测对象相互独立进行的 测试条件下,独立测试结果间的一致程度。 3.8 阳性检出率 positivedetectionrate;Pdr 实际检测为阳性的样品数占总检测样品数的比例。 3.9 阳性符合率 positivecoincidencerate;Pcr 将已知阳性样品判断为阳性的比例。 3.10 阴性符合率 negativecoincidencerate;Ncr 将已知阴性样品判断为阴性的比例。 3.11 假阳性率 falsepositiverate;FPr 将已知阴性样品判断为阳性的比例。 3.12 假阴性率 falsenegativerate;FNr 将已知阳性样品判断为阴性的比例。 4 总体要求 4.1 通用要求 实验室应根据拟进行商品化的植物病原微生物定性分子检测方法的预期用途制定评价方案。方案 中要明确待评价方法的详细操作程序,明确评价样品的数量和来源,并明确测定参数和参数指标要求。 4.2 对评价实验室的要求 参与评价的实验室应符合GB/T27025中的相应要求。 4.3 评价样品要求 用于评价试验的样品应来源清楚,样品状态明确,包括:国内外标准菌/毒种库提供的菌/毒种样品; 由评价实验室利用两种以上参考方法明确鉴定的菌/毒种样品或自行制备的样品;由评价实验室利用两 种以上参考方法同时确定为阳性或阴性的样品等。 阳性样品包括阳性靶标菌/毒株或其核酸、携带靶标菌/毒株的样品或其核酸等,阴性样品包括与靶 标菌/毒株可能有交叉反应的近缘(同属/种或遗传相似度高)菌/毒株或其核酸、同寄主植物上易发生混 合侵染的非靶标菌/毒株或其核酸、携带以上非靶标菌/毒株的样品或其核酸、不携带靶标菌/毒株的样 品或其核酸等。 4.4 评价参数 主要包括特异性(包容性/排他性)、灵敏度、重复性、再现性和假阳性率/假阴性率。 2GB/T46948—2025 5 评价程序 植物病原微生物定性分子检测方法评价流程如图1所示。 图1 植物病原微生物定性分子检测方法评价流程图 6 评价方法 6.1 特异性评价 对于包容性,选择来源明确且不同的阳性样品(宜尽可能多的包含不同地理/寄主来源的靶标菌/毒 株或其核酸,或携带不同来源靶标菌/毒株的样品或其核酸),用同一待评价方法进行检测,每个样品最 少设3个重复。 对于排他性,选择来源明确且不同的阴性样品(宜尽可能多的包含与靶标菌/毒株可能有交叉反应 的近缘菌/毒株或其核酸、同寄主植物上易发生混合侵染的非靶标菌/毒株或其核酸,或携带以上非靶标 菌/毒株的样品或其核酸),用同一待评价方法进行检测,每个样品最少设3个重复。 特异性结果用测定的阳性符合率/阴性符合率表示。 6.2 灵敏度评价 选择来源明确的阳性样品,进行梯度/倍比稀释,每个稀释度设20个重复,使用同一待评价方法进 行检测。计算每个稀释度的阳性检出率,将具有95%阳性检出率的最低检出限量作为灵敏度结果。 阳性检出率计算见公式(1)。 阳性检出率(Pdr)=检测结果为阳性的样品数/总检测样品数×100% …………………………(1) 3GB/T46948—2025 6.3 重复性评价 用同一待评价方法、同一批次的试剂,由同一操作者对至少2份样品进行重复性检测,其中阳性、阴 性样品各不少于1份,阳性样品至少包含1份弱阳性样品,每个样品至少设置20个重复。 重复性结果用测试结果的阳性符合率/阴性符合率表示。 注:结合灵敏度实验结果确定弱阳性样品的判定标准,若弱阳性样品不好获取,用适当稀释阳性样品获得类似的 效果。 6.4 再现性评价 使用同一待评价方法,在3家~5家不同的实验室测试同一套样品。要求样品数量不少于2份,其 中阳性和阴性样品数量各不少于1份,阳性样品至少包含1份弱阳性样品,每个实验室用于测试的样品 应相同,每个样品设3个重复。 再现性结果用测试结果的阳性符合率/阴性符合率表示。 注:结合灵敏度实验结果确定弱阳性样品的判定标准,若弱阳性样品不好获取,用适当稀释阳性样品获得类似的 效果。 6.5 假阳性率/假阴性率测定 要求样品总数量不少于40份,其中阴性样品数量不少于20份,阳性样品数量不少于20份(应包括 已知强阳性和弱阳性样品)。用同一待评价方法对样品进行检测,记录检测出阳性和阴性的样品数量。 注1:对于罕见或少见病原微生物,能酌情减少样品数量。 注2:结合灵敏度实验结果确定弱阳性样品的判定标准,若弱阳性样品不好获取,用适当稀释阳性样品获得类似的 效果。 6.6 阳性符合率/阴性符合率、假阳性率/假阴性率计算 样品的检测结果如与已知结果相一致,则判为真阳性(truepositive;TP)或真阴性(truenegative; TN)。如果与已知结果不一致,则判为假阳性(falsepositive;FP)或假阴性(falsenegative;FN),如表 1所示。 表1 检测结果与已知结果比较表 测试样品已知结果 阳性 阴性 检测结果阳性 真阳性(TP) 假阳性(FP) 阴性 假阴性(FN) 真阴性(TN) 特异性、重复性、再现性结果用测定的阳性符合率/阴性符合率表示,计算见公式(2)、公式(3)。 阳性符合率(Pcr)=TP/(TP+FN)×100%…………………………(2) 阴性符合率(Ncr)=TN/(TN+FP)×100%…………………………(3) 假阳性率/假阴性率计算见公式(4)、公式(5)。 假阳性率(FPr)=FP/(FP+TN)×100%…………………………(4) 假阴性率(FNr)=FN/(FN+TP)×100%…………………………(5) 式中: TP———检测结果和已知结果均为阳性的样品数量; FP———检测结果为阳性已知结果为阴性的样品数量; 4GB/T46948—2025